目前活性最强的抗氧化剂花旗松素的相关医学

一、诱导肺癌细胞凋亡1、中国香港城市大学生物化学系发表的国际医学论文的结论是：目前的研究表明，花旗松素能够抑制各种类型癌细胞的活性，具有抗癌作用。

2、医院医院联合发表的国际医学论文论文的结论是：花旗松素对人肺癌细胞具有明显的抑制作用。Westernblotting实验结果进一步证实了花旗松素抑制肺癌细胞的恶化发展，花旗松素具有明显的诱导肺癌细胞凋亡的作用。

二、预防和治疗癌症（一）、美国明尼苏达大学和韩国国家癌症研究所联合发表的国际医学论文的结论是：花旗松素可以预防多种癌症。在本研究中，花旗松素直接抑制EGFR和PI3-K癌变酶的活性，对皮肤癌具有预防和治疗作用。

（二）、日本国厚生労働省关于花旗松素的研究结论★抗酸化?抗老化作用抗酸化力により活性酸素を消去、免疫力の賦活（シミ、シワ、白内障、飛蚊症、加齢臭、ガン予防…など）★.毛細血管保護血管壁強化。（炎症性疾患、動脈硬化、脳血管障害、歯茎からの出血、青あざ、高血圧の改善）★抹消血液循環の改善赤血球の変形する能力を高めることにより、手足や臓器のすみずみまで血流が改善され、酸素が行きわたる。（白内障、飛蚊症、耳鳴り、冷え、しびれ、肩こりなどの改善）★美肌、アンチエイジング高度の抗酸化力と血流改善による。★.抗炎症?抗アレルギー体内での副腎皮質ホルモンの産生促進。（炎症の緩和やアレルギー症状の緩和）★肝臓保護肝臓の解毒機能を高める。（肝臓障害の改善）★.脂質代謝、高コレステロール、中性脂肪の改善。（過酸化脂質の予防）★利尿作用（むくみの改善）　★II型糖尿病および合併症毛細血管保護作用により血管劣化の修復。（糖尿性網膜症などの合併症改善）★.肺機能改善（肺疾患、気管支炎などの改善）★.脳保護作用慢性的脳血流不全を改善。（頭痛、めまい、耳鳴り、不眠症、うつなどの改善）★放射線治療時の副作用軽減★抗癌細胞

（三）、防治宫颈癌

翟延君，程飞，王添敏，初正云，李娜(辽宁中医药大学药学院，辽宁大连)

摘要：

目的观察和探索花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其作用机理。方法结晶紫染色法检测花旗松素对人Hela细胞的增殖抑制作用；RT—PCR法检测与肿瘤细胞凋亡相关基因的表达。结果花旗松素能够抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，呈剂量依赖关系；花旗松素不能诱导Bcl一2mRNA和BaxmRNA的表达，但能使P53和P21的mRNA表达量增加。结论花旗松素具有良好的体外抑制人宫颈癌Hela细胞增殖作用；花旗松素诱导Hela细胞死亡与细胞凋亡相关，其分子机制可能与升高P53和mRNA表达有关，而与Bcl一2和Bax的蛋白转录无关。

关键词：花旗松素；人宫颈癌Hela细胞；抗肿瘤作用；

RT—PCR中图分类号：R文献标志码：

A文章编号：—()12．-04

／nvitroanticanceractivityoftaxifolinonhumancervicalcancerHelacellsanditsmechanism

ZHAIYan-jun，CHENGFei，WANGTian-min，CHUZheng-yun，LINa(CollegeofPharmacy，LiaoningUnivemityofTraditionalChineseMedicine，Dalian，China)

ABSTRACT：AIMToevaluatetheinvitroanticanceractivityandmechanismoftaxifolin．amajorconstituentofPolygonumorientaleL．．againsthumancervicalcancerHelacells．METHODSTheinhibitoryeffectoftaxifolinontheproliferationofhumancervicalcancerHelacellswasdetectedbycrystalvioletassay．RT—PCRmethodwasusedtoinvestigatetheexpressionofapoptosis—relatedgenes．RESULTSTaxifolinshowedtheinhibitoryeffectontheproliferationofhumancervicalcancerHelacellsinadose—dependentmanner．TaxifolinshowednoeffectontheexpressionofBcl一2mRNAandBaxmRNA．butincreasedtheexpressionofP53mRNAandP21mRNA．CON．CLUSIoNTaxifolinexhibitspotentinhibitionontheproliferationofhumancervicalcancerHelacellsinvitroonandthemechanismofcelldeathinducedbytaxifoliniSrelatedtocellapoptosis．ThemolecularmechanismforcellapoptosisisrelatedtotheupregulationofP53mRNAandP21mRNA．andindependentofBcl2mRNA／BaxmRNAapoptosisproteintranscription．KEYWoRDS：taxifolin；Helacells；anticanceractivity；RT—PCR

中药水红花子为蓼科植物红蓼Polygonumori—entaleL．的干燥成熟果实，资源极其丰富。

本品性寒，味咸；具有散血消瘕、消积止痛的功效；用于瘕瘕痞块、瘿瘤、肿痛、食积不消、胃脘胀痛等症。水红花子主要含黄酮类化合物，其中花旗松素是特征性成分，已作为对照品被年版《中国药典》收载，为含量测定的指标成分HJ。根据水红花子具有抗肿瘤作用的文献报道_2。J，本课题组进行了花旗松素对人宫颈癌Hela细胞形态的影响及DNA片段的影响实验’4J。

本实验通过花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用实验和对凋亡相关基因Bcl．2mRNA、BaxmRNA转录的影响，进一步探讨花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机理，为水红花子药效学研究提供参考资料。

材料和方法

1．1细胞株人宫颈癌HeLa细胞(中国科学院上海细胞生物所)。

1．2药品与试剂花旗松素(北京百灵威化学技术有限公司)，阳性对照：5氟尿嘧啶(5一Fu，天津金耀制药厂)。新生牛血清NBS(大连生物试剂公司)，胰酶(Sigma)，RPMll培养基(GIBCO，NY，USA)，青霉素、链霉素(天津TBD公司)，结晶紫(Sigma)，琼脂糖凝胶(Sigma)，AMV逆转录酶(Sig—ma)，TaqDNA聚合酶(Sigma)，扩增引物B．actin，P53，P21，Bax，Bcl-2(北京鼎国公司)，RNA酶抑制蛋白(Sigma)，Trizol试剂、oligo(dT)(北京鼎国公司)。

1．3仪器与设备二氧化碳培养箱(REVCO)，酶联免疫分析仪(Bio—Radmodel)，倒置显微镜(O．LYMPUS，CK2China)，水平式电泳仪(北京六合仪器厂)，高速冷冻离心机，PCR仪(联星公司产品)，6-孑L板和96孔板(NUNC。MDenmark)，凝胶成像仪

fELETROPHRESISDOCUMEN．TATIONANDANAL．

YSISSYSTEM)。

1．4细胞复苏与培养从一70℃冰箱中取出Hela细胞冻存管，迅速放入37℃水浴融化，融化后用吸管吸出细胞悬液，注入离心管并滴加10倍以上培养液，混合后r／min离心5min，弃上清液，用RPMI一1培养液洗涤1次。然后将细胞接种在含有10％新生小牛血清及青霉素、链霉素的RPMI．1培养液的培养瓶中，置于37oC，5％CO，、饱和湿度的孵箱中培养，维持细胞处于对数生长期备用。

1．5肿瘤细胞的体外生长抑制实验将待测细胞(2×个／孔)接于96孔板中(NUNC。”，Den．mark)，加入IxL的培养液，培养4h，待细胞贴壁后换成2％小牛血清和不同浓度样品的RPMI．1培养液，继续培养。培养12、24、36、48h后，将含有不同浓度样品梯度的培养液倒掉，用50¨L结晶紫染色15～20min，然后再将结晶紫倒掉，将未染色的结晶紫洗掉，由于结晶紫能够将活细胞染色，此时还未死的细胞贴在培养瓶底壁上，并被染成蓝色。在36℃左右烘干，备用。待测时用50恤L的甲醇溶解，再用酶标仪(ELX)测定nm的吸收值，根据吸收值计算抑制率。公式为：生长抑制率=(1—4实验组／A对照组)×％，每次实验重复3次。

1．6RT—PCR检测Bcl一2mRNA、BaxmRNA及mRNA、P21mRNA的表达接种1×／瓶以上个待测细胞，加入适量培养液，待细胞贴壁后，将培养液换成含花旗松素质量浓度为50¨g／mL的新培养液，分别培养0、12、24、36、48h后，将每个培养瓶中的所有细胞收集起来，细胞用PBS反复洗涤数次后，将细胞沉淀溶于1mL的PBS中，转移至1．5mL

EP管中，r／min离心5min，收集细胞沉淀；利用Trizol试剂提取细胞内总RNA。以提取的总RNA为模板，以Oligo．dT协。。为引物进行反转录，以反转录后的cDNA为模板，利用上述合成的引物，进行PCR扩增，反应条件为：94℃，30S；55℃，40S；72℃，45S，30个循环；72℃延伸5rain，反应完毕，将样品于2％琼脂糖凝胶电泳检测(表1)。

1．7统计分析实验数据采用SPSS13．0统计软件进行数据处理，各组间均数采用t检验，结果以i±s表示。

结果

2．1花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制实验花旗松素有较好的抑瘤效果，细胞死亡率随剂量的增加而增加。在样品质量浓度为50仙g／mL，培养48h，5-FU的抑瘤率为61．2％，花旗松素抑瘤率为88．2％，比5-FU效果好(表2)。

2．2花旗松素对凋亡相关基因Bcl-2mRNA、BaxmRNA转录的影响本实验通过花旗松素诱导Bcl一2mRNA和BaxmRNA的表达变化，从基因转录水平研究其诱导HeLa细胞死亡是否与Bcl-2／Bax途径相关。实验结果表明：花旗松素50斗g／mL培养0、12、24、36、48h，Bcl一2mRNA和BaxmRNA的表达均没有变化，说明花旗松素诱导HeLa细胞凋亡与Bcl一2和Bax的途径无关(图1)。

2．3花旗松素对凋亡相关基因mRNA和P21mRNA转录的影响P21和的主要功能是使受短波紫外辐射、化疗药物诱导等引起DNA损伤的细胞，产生细胞周期抑制，进而凋亡，避免错误基因的复制，是细胞保持基因稳定的重要蛋白。P53这种作用主要依赖抑癌基因P21来完成。对于有DNA损伤的细胞，通过激活P53基因启动P21基因表达

来诱导细胞凋亡。本实验结果表明：花旗松素50斗g／mL培养0、12h时表达没有明显变化，而24、36、48h诱导1：53mRNA和P21mRNA的表达增加(图1)。

讨论

3．1花旗松素是水红花子的特征性成分，已作为对照品被年版《中国药典》收载，水红花子现代研究报道具有抗肿瘤作用，对原发性肝癌及子宫肌瘤的治疗有较好的效果。宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，其发病率占女性恶性肿瘤第二位。探讨花旗松素抗肿瘤作用及其作用机理，对开发新的抗肿瘤药物有一定意义。本实验通过花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机理研究，可为水红花子抗肿瘤作用药效学研究提供参考资料。

3．2体外抗肿瘤实验结果可知：花旗松素有良好的体外抑制人宫颈癌Hela细胞作用，抑制率随着剂量的增加及时间的延长而增大。前期的形态学检验结果”1表明，用花旗松素处理12h后，人宫颈癌Hela细胞变圆并从培养瓶壁上逐渐脱落下来，24h后细胞膜发泡并呈现细胞核迸裂，大部分细胞逐渐形成

凋亡小体，说明人宫颈癌HeLa细胞死亡与细胞凋亡途径有关。3．3本实验选择两种途径探讨了花旗松素诱导Hela细胞凋亡机理，一种是与线粒体有关的Bcl-2／Bax途径，另一种是与细胞周期相关的P53／P21途径。实验结果显示，Bax的mRNA和Bcl-2的mRNA的表达水平均没有变化，说明花旗松素诱导HeLa细胞凋亡与Bcl·2／Bax的转录途径无关；P53的mRNA表达量升高，而P21的mRNA的表达量也表现为升高，说明花期松素能够诱导P53mRNA和P21mRNA的表达增加，诱导HeLa细胞凋亡与细胞DNA损伤和细胞周期的抑制有关。

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三、预防和治疗脂肪肝、肝癌1、美国夏威夷癌症研究中心和加拿大癌症研究中心联合发表关于花旗松素预防和治疗人脂肪肝和肝癌的国际医学论文Ourdatasuggestthattaxifolindecreaseshepaticlipidsynthesiswithacon







































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